细胞治疗领域是一种新兴的治疗技术，又称为细胞移植或细胞移植治疗，是指将正常或生物工程改造过的人体细胞移植或输入患者体内，从而达到治疗患者疾病的目的。细胞治疗与传统的药物治疗不同，药物载体使用的是人体活细胞。细胞治疗按照治疗使用的细胞种类可以分为干细胞治疗和免疫细胞治疗两类。目前获批的细胞疗法为CAR-T ，治疗的过程简单描述如下：从癌症病人身上分离免疫T细胞；利用基因工程技术，通过逆转录病毒和慢病毒载体、转座系统（如SB 转座系统）或直接将mRNA转导到T细胞内，使T细胞表面表达嵌和抗原受体（CAR），即成为CAR-T细胞，拥有识别癌细胞和增殖的作用；在体外扩增CAR-T细胞，再将细胞传输回病人体内。细胞治疗的临床试验中，不同于药物治疗，涉及到的疗效检测方法和副作用监控依赖于中心实验室的监测数据。为此本实验为了细胞治疗的临床试验开发了一系列的新技术，包括CAR-T细胞的PK检测，转载病毒的拷贝数监测，微小残余肿瘤细胞（MRD）监控。观合通过多年技术积累，已打造囊括PCR、流式细胞术、病理诊断、骨髓涂片、FISH、特定蛋白检测在内的一站式CAR-T临床试验诊断平台，相关技术居于世界前列。

MRD检测，使用新一代流式（New Generation Flow,NGF)方法， 采用EuroflowTM MRD（CE/IVD）试剂盒，使用InfinicytTM软件，结合Euroflow MRD数据库进行数据分析，以解决普通流式无法实现的分析标准的一致化。该检测方法被国际骨髓瘤工作组（IMWG）和中国多发性骨髓瘤诊治指南共同推荐，其对MRD的检测精度至少可以达到10-5甚至10-6灵敏度，远高于普通流式低于10-4灵敏度，能够更好的为病人疾病状态的疗效判断、预后恢复评价做出更精准的指示。

CAR PK使用流式细胞术通过抗体抗原结果的原理，评估CAR-T细胞在淋巴细胞中的百分比及CAR-T细胞浓度水平，可准确快速地评估CAR-T细胞回输后在病人体内的扩增、分布和续存情况，进而得到相对应的药物代谢动力学数据（PK），为CAR-T细胞药物浓度、药物用量、药物代谢和疾病治疗进展提供依据。为保证检测结果准确性，观合结合大量项目经验，参照《免疫细胞治疗产品临床试验技术指导原则（试行）》、《FDA指南：开发嵌合抗原受体（CAR）T细胞产品的注意事项》、《中国药典》等最终总结出特色、全面、准确、有效的评估检测可靠性的方案，主要涉及抗体种类、方法设计、灵敏度及样本稳定期等难点的确认和改善。

观合医药采用荧光定量PCR的检测方法，自主研发了CAR-T细胞的拷贝数PK检测及安全性数据可复制慢病毒拷贝数检测。CAR-T细胞拷贝数PK检测，针对不同的CarT制剂设计特异引物，并使用探针法进行qPCR检测，应用已知拷贝数的质粒标准品制备标准曲线，并根据标准曲线的结果分析计算出样本的真实拷贝数。可复制慢病毒拷贝数检测，同样使用荧光定量PCR检测方法，并在慢病毒载体通用片段VSV-G区域设计通用引物及探针进行qPCR检测，同时使用已知拷贝数的质粒标准品制备标准曲线，并根据标准曲线的结果分析计算出样本的真实拷贝数，该方法使用通用引物可适应不同的CAR-T细胞生产的安全性检测。

溶瘤病毒是抗击癌症中新兴的“双重威胁”，被用作单一疗法或与现有的检查点抑制剂/ T细胞疗法结合使用，以提供增强的治疗反应。观合投入了大量资源，以创建促进快速发展所需的必要制造和测试基础设施。

• CAR-T PK：CAR拷贝数，CAR细胞计数

• PD指标：B cell aplasia，IL-6/转铁蛋白等免疫表型分析 (流式细胞术)

• 安全性评价指标：细胞因子释放，可复制慢病毒，病毒拷贝数，免疫原性

• 探索性Biomarker：免疫细胞亚群分型，细胞因子释放，微小残留病